Terapia Genica en la Diabetes Tipo 1

En Terapia Genica ex vivo se ha utilizado el Transplantar islotes para mejorar la supervivencia y reducir la respuesta inmunitaria, que consiste en la transferencia de genes antiapoptoticos, proangiogenicos, o inmunomoduladores mediante la utilizaciones de vectores virales o no virales (AAV y LV). Tambien en la terapia in vivo se centra en la transferencia de genes exogenos (Pdx-1, Ngn-3, MafA, IGF-1) a un tipo celular determinado del organimos y lo que se busca es: bloquear la respuesta inmune, regenerar la masa de celulas beta en el pancreas (terapia curatica), prevencion y tratamiento de las complicaciones secundarias (terapia paliativa). Todas estas tecnicas son aún experimentales y su aplicacion en clinica parece lejana.

REGENERAR LA MASA DE CÉLULAS BETA EN EL PÁNCREAS




Inyección sistémica de vectores Ad, AAV, AAV48
Expresión de interleucina 4 en las células beta pancreáticas protege a éstas del ataque autoinmune.
Gen GLP-1 incrementar la replicación
A partir de otros tipos celulares gracias a la expresión de una combinación de factores de transcripción
Genes Pdx-1, Ngn-3 y MafA han conseguido la formación de células productoras de insulina a partir de células exocrinas

MANIPULACIÓN GENÉTICA DE TEJIDOS EXTRAPANCREÁTICOS

Manipulación del hígado
• Expresión del gen de la insulina bajo el control del promotor de la fosfoenolpiruvato carboxicinasa contrarrestaba las alteraciones diabéticas a nivel hepático
• Transferencia mediante vectores virales de genes involucrados en la diferenciación de células beta Pdx-1, NeuroD, Ngn3.
Manipulación del músculo esquelético
• Generación de un «sensor de la glucosa» como resultado de la coexpresión del gen de la insulina y el de la glucocinasa (GK).
• Mediante vectores adenoasociados de serotipo 1 (AAV1) lleva a la completa normalización de la glucemia tanto en condiciones de alimentación como en ayunas, sin causar la aparición de hipoglucemia


Es importante recalcar que todos estos experimentos fueron realizados en ratones de experimentación, algunos de ellos también los realizaron en perros diabéticos con buenos resultados a corto plazo, aun se está investigando sobre los problemas adversos presentados. Pero tienen un futuro prometedor para el tratamiento de la diabetes

Bibliografias

http://www.elsevier.es/es-revista-offarm-4-articulo-terapia-genica-curar-diabetes-13046057
https://elpais.com/diario/2002/05/07/salud/1020722401_850215.html

TERAPIA CON STEM CELLS EN LA DIABETES MELLITUS

La terapia con células madre adiposas es un tratamiento alternativo para ayudar a manejar las complicaciones de la diabetes. Las células madre pueden tener el potencial de reemplazar innumerables células del cuerpo, incluidas las células productoras de insulina. Estas células pueden ayudar en la rehabilitación del cuerpo mediante la sustitución de células enfermas así como revertir la incapacidad de producir una respuesta favorable del sistema inmunológico mediante la regeneración de nuevas células saludables.

El experimento: El equipo creó un modelo de ratón de la diabetes tipo 2 mediante la inducción de algunos marcadores de la enfermedad en los animales - la obesidad , baja respuesta a los niveles de insulina y glucosa en la sangre - de darles de comer una dieta alta en grasas. Luego, el equipo trasplantó ratones con células progenitoras pancreáticas encapsuladas derivadas de embriones humanos células madre . Estas células se desarrollaron en pleno funcionamiento las células beta - un tipo de células en el páncreas que produce insulina - causando los ratones para experimentar mejor metabolismo de la glucosa y una mejora en la capacidad de respuesta a la insulina.
Lo que es más, los ratones que recibieron el trasplante de células madre en combinación con medicación antidiabética experimentaron pérdida de peso rápida, y - en comparación con cualquiera de los tratamientos , vieron mayores mejoras en el metabolismo de la glucosa.

Referencia Bibliografica 

http://diabetes.diabetesjournals.org/content/50/8/1691.short

https://www.medicalnewstoday.com/articles/291244.php

ADN recombinante en la naturaleza

Los virus transfieren ADN entre bacterias y entre especies eucariotas, los virus, que son poco más que material genético envuelto en una cubierta con proteínas, transfieren su material genético durante la infección. Dentro de la célula infectada, los genes se replican y dirigen la síntesis de proteínas virales.

Los genes replicados y las nuevas proteínas virales se ensamblan dentro de la célula y forman nuevos virus que, a su vez, son liberados para infectar a otras células. Por lo general, un virus determinado solo infecta y se replica en las células de ciertas especies bacterianas, animales o vegetales. Durante muchas infecciones virales, las secuencias del ADN viral se incorpora a uno de los cromosomas de la célula huésped. Este ADN puede permanecer ahí durante días, meses o incluso años. Cuando se producen nuevos virus a partir del ADN incorporado, estos pueden integrar por error genes humanos en el genoma del virus; de este modo se crea un virus recombinante..

ADN recombinante artificial en Diabetes Mellitus

Mediante la Ingeniería Genética se ha logrado crear fármacos para pacientes con Diabetes Mellitus mediante el ADN recombinante, permitiendo que la insulina humana pueda producirse en otros organismos y así utilizarla en el tratamiento.
Como ejemplo tenemos:

• Insulina Lispro: se origina con un ADN recombinante producido en E. Coli para el tratamiento de niños y adultos con diabetes que requieran insulina para el mantenimiento de la hemostasia normal de la glucosa. 
• Glusilina: se obtiene por ADN recombinante producido en E. coli; sirve únicamente para el tratamiento en pacientes adultos. 
• Insulina Aspart: se origina con un ADN recombinante en Saccharomyces cerevisae; sirve únicamente para el tratamiento en pacientes adultos. 

Referencias Bibliográficas
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/DNA-recombinante/Tecnica%20DNA%20recombinante.pdf

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1561-29532006000300005&script=sci_arttext

Prueba de PCR para Diabetes Mellitus

Técnica de Southern blot

Desarrollado para detección de genes específicos en ADN celular, el ADN es digerido por enzimas de restricción, fragmentos separados mediante electroforesis; la tinción: bromuro de etidio, los fragmentos de ADN de doble cadena son hidrolizados con ácido débil, desnaturalizados: NaOH. El ADN es transferido: filtro de nitrocelulosa, se incuba durante un tiempo con la sonda marcada. Visualización: exposición a una película de rayos X (sondas radiactivas) o película sensible a la luz (sondas con fluorocromo).


Northern Blot, 

se identificaron cuatro genes mitocondriales codificados diferentes que fueron aumentados en la expresión en la diabetes: citocromo oxidasa I, III citocromo oxidasa, NADH deshidrogenasa IV, y 12S rRNA, todos los cuales se encuentran en la cadena pesada del genoma mitocondrial. Hubo un aumento de 1,5 a 2,2 veces en la expresión de estas moléculas de ARNm en relación con el total de ARN tanto en tipo I y diabetes tipo II según la evaluación de los análisis de transferencia de Northern blot. El aumento de la expresión del gen mitocondrial puede contribuir al aumento de la respiración mitocondrial observada en diabetes no controlada.

Microarrays de ADN 

han proporcionado a los investigadores médicos con una poderosa herramienta para estudiar los mecanismos de las enfermedades complejas, como la obesidad y la diabetes tipo 2 (DT2). Perfiles de expresión génica es la principal aplicación de microarrays de ADN hasta ahora. La grasa subcutánea, grasa visceral, adipocitos y preadipocitos, músculo, hígado, páncreas y núcleos específicos en el hipotálamo en condiciones normales y de enfermedad se utilizan en el tratamiento del perfil de expresión de genes en la obesidad y T2D. En esta revisión, la aplicación de microarrays para dilucidar el papel de la proteína de unión a retinol 4 como un vínculo entre la obesidad y la DM2.

Bibliografia
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0018613
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC441479/

Análisis de PCR de un articulo cientifico de Diabetes Mellitus

Tema:
Efectividad de la metformina en pacientes con diabetes tipo II según variantes en el gen SLC22A1

Objetivo:
Determinar como actua la metformina en el interior de los hepatocitos por un transportador codificado por el gen SLC22A1.

Muestra:
ADN obtenida de la sangre periferica de pacientes

Tipo de Ácido Nucleico:
DNA genomico

Extraccion:

Lisis:
Separación: Wizard Genomic DNA Purification Kit
Purificación:

Gen Amplificador:
Gen SLC22A1

Tipo de PCR:
PCR-RFLP (PCR-restriction fragment length polymorphism assay)

Pasos de PCR:
Desnaturalizacion: 94 °C por 50 s
Hidratacion: 58 °C por 50 s                         ciclo 35
Extension: 72 °C por 60 s

Visualización:
EFO

Bibliografias:
https://www.researchgate.net/profile/Nestor_Soria2/publication/286230948_Effectiveness_of_Metformin_in_patients_with_type_II_diabetes_related_to_variants_in_the_SLC22A1_gene/links/56a3b1e008ae232fb2058bea.pdf

Pruebas de Tamizaje y Confirmatorias de la Diabetes Mellitus

• Pruebas de TamizajeGlucosa Postprandial-Prueba de tolerancia oral a la glucosa (PTOG)
• Glucosa Basal: Ayunas

La glucemia en ayunas es la prueba más sencilla para el tamizaje oportunístico de Diabetes Mellitus en personas asintomáticas que por algún motivo acuden a un servicio de salud. Sin embargo, la prueba de oro para el tamizaje de diabetes en estudios poblacionales sigue siendo la medición de la glucemia 2 horas post carga de glucosa . Es muy importante tener en cuenta que una prueba de tamizaje solo indica una alta probabilidad de tener DM y debe ser confirmada con una prueba diagnóstica.

Pruebas Confirmatorias
.

• Determinación de glucosa en sangre
• Diagnostico de hemoglobina glicosilada (Hba1c)
• Determinacion de anticuerpo por metodo de ELISA

Otro método confirmatorio para la diabetes es el diagnóstico de hemoglobina glicosilada (HbA1c), la cual es una heteroproteína de la sangre que resulta de la unión de la Hb con glucosa libre. El resultado normal de esta prueba es de 4-6%, si el resultado es anormalmente superior significa que los valores de glucosa en sangre no han sido regulados por un largo tiempo y podría causar complicaciones.

En personas embarazadas:

Test de O´Sullivan: Primera muestras, Glucosa Basal y luego de 1 hora tomar una muestra con carga de 50 gramos de glucosa.
Más Información:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-21252006000100012&script=sci_arttext
http://revistaalad.com.ar/pdfs/0904_CriteriosD.pdf
http://apuntesmedicos.net/2008/05/27/diagnostico-de-la-diabetes-mellitus-y-otros-problemas-metabolicos-asociados-a-regulacion-alterada-de-la-glucosa/

Referencia Bibliográfica
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/patientinstructions/000082.htm
http://www.cun.es/area-salud/pruebas-diagnosticas/analisis-diagnostico-la-diabetes-mellitus

Que es el Día Mundial de la Diabetes

El Día Mundial de la Diabetes se creó en 1991 como medio para aumentar la concienciación global sobre la diabetes. Es una oportunidad perfecta para dirigir la atención del público hacia las causas, síntomas, complicaciones y tratamiento de esta grave afección, que se encuentra en constante aumento en todo el mundo.

¿Qué es el Día Mundial de la Diabetes?

El Día Mundial de la Diabetes (DMD) es la campaña de concienciación sobre la diabetes más importante del mundo. Fue instaurado por la Federación Internacional de Diabetes (FID) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) en 1991, como respuesta al alarmante aumento de los casos de diabetes en el mundo. En 2007, Naciones Unidas celebró por primera vez este día tras la aprobación de la Resolución en diciembre de 2006 del Día Mundial de la Diabetes, lo que convirtió al ya existente Día Mundial de la Diabetes en un día oficial de la salud de la ONU.

¿Cómo empezó todo?

El Día Mundial de la Diabetes fue introducido por la Federación Internacional de Diabetes (FID) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) en 1991, ante el preocupante aumento en la incidencia de la diabetes alrededor del mundo. Desde entonces, el evento ha aumentado en popularidad cada año.

¿Cuándo se celebra?

El Día Mundial de la Diabetes se celebra cada año el 14 de noviembre. Se escogió esta fecha siendo el aniversario de Frederick Banting quien, junto con Charles Best, concibió la idea que les conduciría al descubrimiento de la insulina, en octubre de 1921. Mientras muchos eventos se desarrollan durante o alrededor de ese día, la campaña se desarrolla a lo largo de todo el año.

¿Dónde se celebra?

¡En todo el mundo!

El Día Mundial de la Diabetes reúne a millones de personas en más de 160 países para aumentar la concienciación sobre la diabetes, incluyendo niños y adultos afectados por la diabetes, profesionales sanitarios, individuos con poder de decisión en materia sanitaria y los medios de comunicación.

¿Cómo se celebra?

La comunidad internacional de la diabetes, que incluye a las asociaciones miembros de la Federación Internacional de Diabetes, las organizaciones de la diabetes, ONG, departamentos sanitarios y empresas, desarrollan una amplia variedad de actividades, dirigidas a diversos grupos. Algunas de las actividades organizadas cada año son:
Programas de radio y televisión, Actividades deportivas
Proyecciones gratuitas sobre la diabetes y sus complicaciones
Encuentros informativos públicos, Campañas de carteles y folletos
Exposiciones y talleres sobre la diabetes, Ruedas de prensa
Artículos en periódicos y revistas Actividades para niños y adolescentes, Iluminación de monumentos, Círculos azules humanos, Marchas, Carreras, Carreras de bicicleta